大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 表達(dá)分析
簡(jiǎn)要描述：
大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 表達(dá)分析BL21-CodonPlus菌株來源于Stratagene公司高性能的BL21-Gold菌株，特別適合在大腸桿菌內(nèi)高水平表達(dá)異源蛋白
產(chǎn)品時(shí)間：2026-04-02
打印當(dāng)前頁BL21-CodonPlus (DE3)-RIL Chemically Competent Cell
大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
產(chǎn)品訂購：
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
MF2338-1000UL | BL21-CodonPlus (DE3)-RIL化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×100μl | 470 |
MF2338-5000UL | BL21-CodonPlus (DE3)-RIL化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 50×100μl | 1990 |
產(chǎn)品組分：
組分編號(hào) | 組分名稱 | 貨號(hào)（規(guī)格） | |
MF2338-1000UL | MF2338-5000UL | ||
MF2338-A | BL21-CodonPlus (DE3)-RIL Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
MF2338-B | ControlVector puC19,10pg/μl | 10μl | 10μl |
菌株描述
BL21-CodonPlus菌株來源于Stratagene公司高性能的BL21-Gold菌株，特別適合在大腸桿菌內(nèi)高水平表達(dá)異源蛋白。由于異源蛋白來源宿主大量存在的某些tRNA在大腸桿菌內(nèi)很是稀少，因此，想在大腸桿菌內(nèi)有效表達(dá)異源蛋白通常受到限制。外力驅(qū)動(dòng)下的高水平表達(dá)異源蛋白會(huì)耗盡已有的稀有tRNA，導(dǎo)致翻譯中止。
BL21-CodonPlus菌株正是根據(jù)此缺陷而基因改造后的菌株，額外添加在大腸桿菌內(nèi)zui常見限制異源蛋白表達(dá)的幾種tRNA的基因拷貝。這些tRNA的存在使得許多原來在傳統(tǒng)BL21菌株內(nèi)表達(dá)很弱的異源蛋白能夠在BL21-CodonPlus菌株內(nèi)大量表達(dá)。BL21-CodonPlus-RIL補(bǔ)充大腸桿菌缺乏的三種稀有密碼子（AGA/AGG, AUA, CUA）對(duì)應(yīng)的tRNA（argU, ileY, leuW），顯著提高外源基因，尤其是富含AT基因的異源蛋白在大腸桿菌內(nèi)的表達(dá)。
BL21-CodonPlus (DE3)-RIL菌株染色體還整合了λ噬菌體DE3溶原體（其上攜帶lacUV5啟動(dòng)子調(diào)控的T7 RNA聚合酶基因），可用于pET系列、pCAL等載體的蛋白表達(dá)，同時(shí)具有氯mei素和四環(huán)素抗性。
BL21-CodonPlus (DE3)-RIL菌株基因型：F–ompT hsdS(rB–mB–) dcm+ TetR gal λ(DE3) endA Hte [argU ileY leuW CamR]
產(chǎn)品描述
本品是大腸桿菌BL21-CodonPlus (DE3)-RIL菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的熱激轉(zhuǎn)化。經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>108 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。
保存與運(yùn)輸條件
保存：-80℃保存，六個(gè)月有效。
運(yùn)輸：干冰運(yùn)輸。
注意事項(xiàng)
1） 感受態(tài)細(xì)胞必須用干冰運(yùn)輸。感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)在-80℃保存，不可反復(fù)凍融且放置時(shí)間過長(zhǎng)，否則會(huì)減低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2） zuihao在冰上融化感受態(tài)細(xì)胞。
3） 進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí)，需在相應(yīng)溫度及無菌條件下進(jìn)行。
4） 為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可保留部分連接反應(yīng)液以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到zui低。
5） 產(chǎn)品包裝內(nèi)含質(zhì)粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供對(duì)照實(shí)驗(yàn)用。
6） BL21-CodonPlus (DE3)-RIL菌株攜帶pACYC質(zhì)粒，除復(fù)蘇培養(yǎng)基無抗生素外，其他培養(yǎng)基、培養(yǎng)液都需添加34μg/ml的氯mei素，以防質(zhì)粒丟失。
7） 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)下進(jìn)行】
1） 從-80℃冰箱取出取感受態(tài)細(xì)胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物），用手輕彈管底輕輕混勻（避免用槍吹打），冰浴靜置25min。
2） 42℃熱激45s，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2min。此過程不要搖動(dòng)離心管。
3） 向每個(gè)離心管中加700 μl無菌的2YT或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，200 rpm振蕩培養(yǎng)60min，目的使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。
4） 低速離心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用槍輕輕吹打重懸菌塊，之后加到含34μg/ml氯mei素和所選質(zhì)粒篩選抗生素的2YT或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃過夜培養(yǎng)。
【注意】：
a）涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可不用離心，直接取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，則通過離心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。
b）新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。
c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。
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名稱 | 規(guī)格 | |
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MF2336-1000UL | BL21-AI Chemically Competent Cell大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×100μl |
MS0023-25G | Streptomycin Sulfate, USP Grade硫酸鏈mei素 | 25g |
MS0021-10G | Chloramphenicol, USP Grade氯mei素 | 10g |
MS0018-10G | Ampicillin, Sodium Salt氨芐青mei素鈉 | 10g |
MS0017-5G | Carbenicillin, Disodium Salt羧芐青mei素二鈉鹽 | 5g |
MS0019-10G | Kanamycin Sulfate硫酸卡那mei素 | 10g |
MS0014-1G | Rifampicin, USP Grade利fu平 | 1g |
附錄II BL21-CodonPlus(DE3)兩款菌株的特征比較
菌株名稱 | BL21-CodonPlus(DE3)-RIL | BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL |
菌株編號(hào) | MF2338 | MF2337 |
基因型 | E. coli B F– ompT hsdS(rB– mB–) dcm+ Tetr gal λ(DE3) endA Hte [argU ileY leuW Camr] | E. coli B F– ompT hsdS(rB– mB–) dcm+ Tetr gal λ(DE3) endA Hte [argU proL Camr] [argU ileY leuW Strep/Specr |
tRNA基因 | argU (AGA, AGG), ileY (AUA), leuW (CUA) | argU (AGA, AGG), ileY (AUA) , proL (CCC), leuW (CUA) |
攜帶抗性 | 氯mei素+四環(huán)素 | 氯mei素+四環(huán)素+鏈mei素+壯觀mei素 |
誘導(dǎo)方式 | IPTG誘導(dǎo)的T7聚合酶表達(dá)（lacUV5啟動(dòng)子） | IPTG誘導(dǎo)的T7聚合酶表達(dá)（lacUV5啟動(dòng)子） |
優(yōu)勢(shì) | 高水平表達(dá) | 高水平表達(dá) |
缺點(diǎn) | T7聚合酶的泄露表達(dá)可能引起潛在毒性蛋白的非誘導(dǎo)表達(dá) | T7聚合酶的泄露表達(dá)可能引起潛在毒性蛋白的非誘導(dǎo)表達(dá) |
— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品與實(shí)驗(yàn)服務(wù)工作，主要從事細(xì)胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信"的經(jīng)營(yíng)理念。堅(jiān)持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。