廣譜型蛋白酶抑制劑混合物（不含EDTA，100× DMSO儲(chǔ)液）《促xioa中》

產(chǎn)品標(biāo)簽

AEBSF；Pepstatin A；Roche cOmplete™ Protease Inhibitor Cocktail 蛋白酶抑制劑混合物；Pierce Halt Protease Inhibitor Cocktail；Roche PhosSTOP™ 磷酸酶抑制劑混合物； PMSF；

產(chǎn)品信息

溫馨提示：見(jiàn)我司（懋康生物）整理的蛋白酶抑制劑cocktail產(chǎn)品專題（含 RochecOmplete™）。

溫馨提示：見(jiàn)我司（懋康生物）整理的磷酸酶抑制劑cocktail產(chǎn)品專題（含 RochePhosSTOP™）。

溫馨提示：見(jiàn)我司（懋康生物）整理的單一蛋白酶/磷酸酶抑制劑產(chǎn)品專題。

產(chǎn)品描述

細(xì)胞內(nèi)源蛋白的表達(dá)和降解一般維持平衡狀態(tài)，因此正常生理?xiàng)l件下內(nèi)源蛋白含量相對(duì)穩(wěn)定。然而體外研究中，蛋白合成過(guò)程終止，而細(xì)胞裂解得到的粗提物含大量的內(nèi)源性蛋白酶，依然能發(fā)揮蛋白水解活性，影響蛋白得率，進(jìn)而干擾相關(guān)蛋白表達(dá)和功能研究。因此，為了防止蛋白純化過(guò)程的蛋白不被這些蛋白酶降解，需要加入蛋白酶抑制劑來(lái)抑制其活性。

本品是多種常見(jiàn)蛋白酶抑制劑的混合物，包含AEBSF、Aprotinin、Bestatin、E-64、Leupeptin、Pepstatin，廣譜抑制來(lái)源于原代細(xì)胞、哺乳動(dòng)物細(xì)胞、動(dòng)植物、細(xì)菌、酵母等組織或細(xì)胞等裂解物中的多種蛋白酶活性。本品不含EDTA（一種金屬蛋白酶抑制劑），適用于活性中心為金屬離子依賴性蛋白的研究。本品兼容于后續(xù)的固定化金屬離子親和層析（Immobilized metal-chelate affinity chromatography, IMAC）、2-D 凝膠電泳以及天然凝膠電泳等蛋白分析研究。

本品以100× DMSO儲(chǔ)存液的形式提供，適用于蛋白純化，蛋白免疫印跡（Western Blot），免疫（共）沉淀（IP/Co-IP），蛋白下拉（Pull-down assay），免疫熒光（IF），免疫組化（IHC），以及激酶研究等多種實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品成分

保存與運(yùn)輸方法

保存：-20℃凍存，1年有效。

運(yùn)輸：冰袋運(yùn)輸。

使用方法

1）使用前室溫平衡直至完quan溶解【注意：DMSO低溫下融化較慢，建議25℃下融化】，低速震蕩以保證各成分均勻。

2）按照1:100的比例（體積比）加到適量抽提試劑（比如細(xì)胞或組織裂解液），混勻，再進(jìn)行樣品蛋白的提取。或根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊约八囵B(yǎng)的特定細(xì)胞和組織，對(duì)使用比例進(jìn)行摸索和優(yōu)化。【注】：按照1:100建議比例，1ml本品可以抑制從20g濕重細(xì)胞裂解獲得的蛋白酶活性。

注意事項(xiàng)

1）傳統(tǒng)蛋白酶抑制劑（比如：AEBSF、Aprotinin、Bestatin、E-64、Leupeptin）不能夠抑制某些去泛素化（DUB）蛋白酶（如ATAXIN-3）的功能 【來(lái)源文獻(xiàn)：Neil D. Rawlings, Guy Salvesen et al. Handbook of Proteolytic Enzymes, Vol.1, 2012】。

2）本品具廣譜蛋白酶抑制活性，不具有磷酸酶抑制活性。若需要進(jìn)行磷酸化蛋白研究，請(qǐng)選擇廣譜型磷酸酶抑制劑混合物（100×儲(chǔ)液）（貨號(hào)：MP1612）來(lái)滿足實(shí)驗(yàn)要求。

3）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

常見(jiàn)問(wèn)題

1. 為什么要用蛋白酶抑制劑混合物（Protease Inhibitor Cocktail）？

本蛋白酶抑制劑混合物屬于低毒且全面型的蛋白保護(hù)試劑，zui大限度保護(hù)蛋白使其免于被內(nèi)源性蛋白酶降解。目前對(duì)微量表達(dá)蛋白如信號(hào)通路蛋白，受體蛋白，使用免疫共沉淀（Co-IP），蛋白下拉（Pull-down assay）等來(lái)獲取樣品，此時(shí)蛋白酶抑制劑混合物的加入尤為重要，因其比單一抑制劑（比如PMSF）更為有效。

2. 蛋白酶抑制劑混合物（Protease Inhibitor Cocktail）是否能進(jìn)一步稀釋使用？

蛋白酶活性抑制效果和眾多因素有關(guān)，比如目標(biāo)蛋白降解的難易程度，蛋白酶類型和濃度，蛋白酶活性高低，以及抑制劑的濃度都會(huì)影響最終的保護(hù)效果。本品采用經(jīng)典濃度配比，確保對(duì)不同類型的蛋白酶都有充分的抑制效果，建議按照建議比例（1:100）稀釋使用。如果有使用其他品牌的蛋白酶抑制劑混合物，以更低的濃度達(dá)到良好的效果，可參照相應(yīng)比例來(lái)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。建議在推薦比例使用上達(dá)到理想效果的基礎(chǔ)上，可做進(jìn)一步稀釋的摸索和測(cè)試。

3. 傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)常用PMSF來(lái)保護(hù)蛋白，蛋白酶抑制劑混合物（Protease Inhibitor Cocktail）與其相比有何優(yōu)勢(shì)？

PMSF（苯j(luò)ia基磺xian氟，CAS：329-98-6）是經(jīng)典的絲氨suan蛋白酶抑制劑，廣泛用于細(xì)胞裂解純化蛋白過(guò)程。然而，其具有許多明顯的缺點(diǎn)，逐步被保護(hù)效果更好且更安全的單一蛋白酶抑制劑或蛋白酶抑制劑混合物所替代。主要缺點(diǎn)1）毒性較高，半致死量為200mg/kg；而其替代物AEBSF，半致死量為2834mg/kg，毒性遠(yuǎn)低于PMSF十四倍多，同時(shí)保持相當(dāng)?shù)囊种菩Ч覍?duì)很多種絲氨suan蛋白酶的抑制比PMSF更迅速；2）半衰期短，在水溶液中只有30min，細(xì)胞裂解過(guò)程中太容易失效。而蛋白酶抑制劑cocktail不僅僅保護(hù)全面且效果持續(xù)更加久。

4. DMSO是否會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生副作用？

DMSO（二甲基亞砜）基本不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。生物科學(xué)領(lǐng)域DMSO為很多生物活性物質(zhì)的有機(jī)溶劑，比如蛋白結(jié)晶，免疫共沉淀等要求較高實(shí)驗(yàn)中也會(huì)使用DMSO。細(xì)胞研究中，低溫條件下DMSO還是一種廣泛使用且優(yōu)秀的細(xì)胞冷凍保護(hù)劑。

常見(jiàn)蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑：

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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