酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞表達(dá)分析
簡要描述：
酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞表達(dá)分析BY4741菌株是來源于S288C的一組缺失菌株成員之一，這些菌株通過敲除其常用選擇性標(biāo)記基因來最小化或去除與對應(yīng)載體上常用的選擇性標(biāo)記基因的同源性，同時不會顯著影響鄰近基因的表達(dá)。
產(chǎn)品時間：2025-12-19
打印當(dāng)前頁BY4741 Chemically Competent Cell
酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
溫馨提示
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產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 價格（元） |
BY4741 Chemically Competent Cell 酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | MF2366-1000UL | 10×100μl | 350 |
MF2366-5000UL | 50×100μl | 1430 |
產(chǎn)品包裝
組分編號 | 組分名稱 | 保存 | 貨號（規(guī)格） | |
MF2366-1000UL | MF2366-5000UL | |||
MF2366-A | BY4741Chemically Competent Cell | -80℃ | 10×100μl | 50×100μl |
MF2366-B | pYES2 Control Vector (10ng/μl) | -80℃ | 10μl | 10μl |
MF2366-C | Carrier DNA (10μg/μl) | -20℃ | 100μl | 500μl |
MF2366-D | PEG/LiAC Solution | +4℃ | 5ml | 25ml |
保存與運(yùn)輸方法
保存：其中感受態(tài)細(xì)胞按標(biāo)簽注明置于-80℃保存，三個月有效。其他組分按照標(biāo)簽注明保存，一年有效。
運(yùn)輸：干冰運(yùn)輸。
產(chǎn)品描述
BY4741菌株是來源于S288C的一組缺失菌株成員之一，這些菌株通過敲除其常用選擇性標(biāo)記基因來最小化或去除與對應(yīng)載體上常用的選擇性標(biāo)記基因的同源性，同時不會顯著影響鄰近基因的表達(dá)。BY4741是實(shí)驗(yàn)室常用菌株，為配子MATa型，廣泛應(yīng)用于鈉-鉀離子平衡，細(xì)胞抗鹽，各種金屬離子的吸收，重金屬毒性研究，各種糖類、碳源對真核細(xì)胞生長的影響，以及過氧化物、超氧化物的吸收和運(yùn)輸?shù)难芯恐小?/p>
BY4741菌株是組氨suan、亮氨suan、甲硫氨suan和尿mi啶缺陷型菌株，可直接通過PEG/LiAc將pYES2質(zhì)粒轉(zhuǎn)化進(jìn)入BY4741細(xì)胞。質(zhì)粒pYES2的篩選標(biāo)志為Ura，可用SD-Ura進(jìn)行篩選。
本品為經(jīng)特殊工藝制備的BY4741酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞，用pYES2質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率＞103cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存三個月。
基因型
MATa his3Δ1 leu2 met15Δ ura3-52
注意事項(xiàng)
zuihao在冰上融化感受態(tài)細(xì)胞。
轉(zhuǎn)化高濃度質(zhì)?？上鄳?yīng)減少用于涂板的菌量。同時轉(zhuǎn)化2-3種質(zhì)?？蛇m當(dāng)增加質(zhì)粒的用量。
BY4741對高溫敏感，zui適生長溫度為27-30℃，一旦高于31℃，生長速度和轉(zhuǎn)化率都呈指數(shù)下降。
若使用pYES2質(zhì)粒表達(dá)蛋白，需在培養(yǎng)基中加入2%半乳糖，以誘導(dǎo)目的基因的表達(dá)。注意篩選培養(yǎng)基中不用加半乳糖。當(dāng)需要目的蛋白表達(dá)時，需加入半乳糖代替葡萄糖作為碳源。
酵母菌在缺陷培養(yǎng)基上生長速度比YPDA培養(yǎng)基慢，營養(yǎng)缺陷成分越多，生長越慢，以轉(zhuǎn)化涂板為例：涂YPDA平板于29℃，48h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆；涂SD單缺平板于29℃，48-60h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆；涂SD雙缺平板于29℃，60-80h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培養(yǎng)可見直徑1mm克??；
酵母感受態(tài)細(xì)胞不易長期保存，隨著保存時間的延長轉(zhuǎn)化效率會不斷下降，建議不超過3個月。
為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用方法
Carrier DNA于使用前通過加熱處理使其變性為單鏈狀態(tài)，方法如下：95-100℃水浴或金屬浴3min，快速插入冰中，靜置3min。重復(fù)一次。
取100 µl冰上融化的BY4741化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞，依次加入預(yù)冷的目的質(zhì)粒1-3 µg，單鏈Carrier DNA10 µl，PEG/LiAc 500µl，用槍吹打幾次充分混勻，30℃水浴30 min（在15min時翻轉(zhuǎn)6-8次混勻）。
之后將管子放42℃水浴15 min（在7.5min時翻轉(zhuǎn)6-8次混勻）。
5000 rpm離心40s棄上清，用400 µl ddH2O重懸沉淀，離心30s棄上清。
用50 µl ddH2O重懸，涂板，放入29℃培養(yǎng)48-96 h。
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— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】
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