Laurdan (6-Dodecanoyl-2-Dimethylaminonaphthalene)

脂膜熒光探針

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

6-丙烯酰基-2-二甲氨基萘（6-Dodecanoyl-2-Dimethylaminonaphthalene,Laurdan），是一種極性敏感的熒光探針，用于膜內(nèi)脂筏（Lipid rafts）的成像分析。適用于廣義偏振（GP）成像和掃描熒光相關(guān)光譜（FCS）。適用于活細(xì)胞和固定細(xì)胞，以及用多光子顯微鏡檢測的全組織成像分析。

Laurdan是由一條月桂酸長鏈連接到一個(gè)萘分子上組合而成。脂肪酸的疏水性尾使探針能牢牢嵌入脂質(zhì)雙分子層；而分子上的萘部分定位在膜磷脂的甘油骨架上。Laurdan的化學(xué)結(jié)構(gòu)和膜定位性使其對脂質(zhì)雙分子層中水分子的存在和流動性都非常敏感。Laurdan在廣義偏振的定量能用于鑒別磷脂相態(tài)。當(dāng)用340nm激發(fā)，凝膠相的廣義偏振值是0.6，液晶相的廣義偏振值是-0.2。廣義偏振僅隨相態(tài)而變化，不會因一極性頭部或4-10范圍內(nèi)的pH變化而變化。

產(chǎn)品特性

1） CAS NO.：74515-25-6

2） MDL NO：MFCD00467560

3） 化學(xué)名：1-[6-(Dimethylamino)-2-naphthalenyl]-1-dodecanone

4） 分子式：C24H35NO

5） 分子量：353.54

6） 純度：≥98%

7） 外觀：固體

8） 溶解性：溶于DMF (10mM)

9） 熒光：λex/ λem =366/497 nm (methanol)

【注意】：Laurdan插入膜后，熒光光譜對周圍磷脂生理狀態(tài)非常敏感。最大激發(fā)和發(fā)射波長分別是366/497nm。在膜的凝相態(tài)和液相態(tài)的最大發(fā)射波長分別為~440n和~490nm。

10）化學(xué)結(jié)構(gòu)式：

保存與運(yùn)輸方法

保存：2-8oC避光干燥保存，亦可置于-20oC避光干燥延長保存，至少2年有效。

運(yùn)輸：室溫運(yùn)輸。

注意事項(xiàng)

1）熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2）為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

產(chǎn)品使用

一、 儲存液制備

將低溫保存的Laurdan（Mw: 353.54）置于室溫回溫至少20min，低速離心后加入一定量的DMF配制成適量濃度的母液，比如10mM（往5mg粉末加入1.41ml DMF，充分溶解即可）。根據(jù)單次用量將儲存液分裝，≤-20℃避光干燥保存（-20℃ 1-2個(gè)月內(nèi)使用；-80℃保存3-6個(gè)月內(nèi)使用）。需注意溶液內(nèi)濕度的逐漸積累會隨著時(shí)間引起探針聚集，從而務(wù)必干燥保存儲存液。

二、 染色工作液制備

用HHBS、HBSS、不含血清的基礎(chǔ)培養(yǎng)基或無血清培養(yǎng)基等稀釋Laurdan儲存液到適宜的工作濃度，比如：5-50µM。最佳的工作濃度需自行優(yōu)化。染色工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用。

三、 操作步驟（以細(xì)胞染色為例）

以下操作步驟僅做參考，用戶需結(jié)合自身的實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛯?shí)驗(yàn)條件來優(yōu)化整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程。

應(yīng)用示例（來自文獻(xiàn)，僅做參考）

文獻(xiàn)1）Pilkington, E., Gurzov, E., Kakinen, A. et al. Pancreatic β-Cell Membrane Fluidity and Toxicity Induced by Human Islet Amyloid Polypeptide Species. Sci Rep 6, 21274 (2016). 

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>Laurdan用來測定細(xì)胞膜相態(tài)（Lipid order）和比率成像分析。

實(shí)驗(yàn)方法：

j儲存液：Laurdan溶于DMSO配制成4mM儲存液。

k染色流程：a）MIN6小鼠胰島β細(xì)胞接種到包被有多聚賴氨酸的8孔板，培養(yǎng)過夜。b）成像前，去除舊培養(yǎng)基，更換不含血清的Opti-MEM，加入Laurdan染料使其工作濃度為50μM，加載至少30min使染料插入細(xì)胞膜達(dá)到平衡。c）將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到安裝有細(xì)胞培養(yǎng)室的Leica SP8倒置共聚焦顯微鏡，選取每孔的適當(dāng)區(qū)域（至少10個(gè)活細(xì)胞）進(jìn)行觀察。加入不同藥物到相應(yīng)孔內(nèi)。以1-30min為時(shí)間點(diǎn)，收集2h內(nèi)的成像數(shù)據(jù)。Lauran插入膜后用405nm激發(fā)線激發(fā)，分別讀取430~470nm（代表脂膜處于凝膠/液態(tài)有序相）或480~550nm（代表脂膜處于液體不穩(wěn)定相）。

染色示例：

Fig. Laurdan dye as an indicator of cell membrane lipid order and ratiometric imaging.

Laurdan (6-Dodecanoyl-2-dimethylaminonaphthalene) is a lipophilic dye capable of partitioning into cell phospholipid membranes (A). When excited at the 405?nm laser line, Laurdan emits fluorescence at 450?nm when the cell membrane is in the gel/liquid ordered phase (lo; left panel) and redshifts to 500?nm when the cell membrane is in the liquid disordered phase (ld; right panel). hIAPP monomers, oligomers and amyloid fibrils are predicted to cause lipid disorder (A). Intensity shifts between the ordered and disordered channels can be quantified as generalised polarisation (GP) values. A flowchart outlining the calculation of GP values from raw ratiometric confocal images in the ordered and disordered channels is represented by (B).

文獻(xiàn)2）Mizuno M, Matsuzaki T, Ozeki N, Katano H, Koga H, Takebe T, Yoshikawa HY, Sekiya I. Cell membrane fluidity and ROS resistance define DMSO tolerance of cryopreserved synovial MSCs and HUVECs. Stem Cell Res Ther. 2022 May 3;13(1):177. doi: 10.1186/s13287-022-02850-y. PMID: 35505370; PMCID: PMC9066911.

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模篖aurdan用來測定細(xì)胞膜流動性（Cell membrane fluidity）。

實(shí)驗(yàn)方法：

j儲存液：Laurdan溶于DMSO配制成9mM儲存液。

k染色流程：于實(shí)驗(yàn)前將Laurdan儲存液用RPMI 1640稀釋到工作濃度（33μM），細(xì)胞于室溫孵育30min。用共聚焦顯微鏡捕獲細(xì)胞熒光圖片。405nm激發(fā)光源，分別測定發(fā)射波長在406-460nm（I406–460）和470-530nm（I470–530）的熒光強(qiáng)度，計(jì)算廣譜偏振（GP），從而評估膜流動性。

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— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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