GV3101(pSoup-p19) Chemically Competent Cell

農桿菌化學感受態細胞

產品標簽：

GV3101(pSoup-p19) 菌株；農桿菌感受態細胞；Rifampicin（Rif） 利fu平；Kanamycin（kan）卡那mei素；EHA105；LBA4404；GV3101；AGL1；植物轉基因研究；

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產品描述：

GV3101菌株的背景為C58型，核基因含利fu平抗性基因rif。為了便于轉化操作，此菌株攜帶一無自身轉運功能的胭脂堿型Ti質粒pMP90（pTiC58DT-DNA），此質粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pMP90（pTiC58DT-DNA）質粒自身的T-DNA轉移功能雖被破壞，但可以幫助轉入的雙元載體T-DNA順利轉移）。pMP90（pTiC58DT-DNA）型Ti質粒攜帶篩選標簽Gent，賦予GV3101菌株慶大mei素抗性。在GV3101菌株中轉入help質粒：pSoup-p19，即得到GV3101(pSoup-p19)菌株，可協助pGreen，62SK，pGs2系列質粒在農桿菌內復制，同時賦予該菌株四環素（Tet）抗性。另外，來源于番茄叢矮病毒的p19蛋白，能抑制宿主對外源基因的RNA沉默效應，提高異源基因轉錄子的穩定性，進而改善異源蛋白的表達。本菌株適用于擬南芥、煙草、玉米、土豆等植物的轉基因操作。

我司（懋康生物）提供的GV3101(pSoup-p19)化學感受態細胞經特殊工藝制作，基因型C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) (gentR) Nopaline (pSoup-p19-tetR)，經pGs2質粒（卡那mei素抗性）檢測轉化效率>104 cfu/μg DNA。

產品組分：

保存與運輸條件：

保存：-80℃保存，一年有效。

運輸：干冰運輸。

注意事項

1） 感受態細胞應保存在-80℃，不可反復凍融和放置時間過長，以免降低感受態細胞的轉化效率。

2） 整個轉化操作，嚴格根據相應溫度及無菌條件要求進行。

3） 加入質粒的體積不應大于感受態體積的1/10。質粒不純或存在乙醇等有機物污染，會導致轉化效率急劇下降。質粒增大一倍，轉化效率下降一個數量級。

4） 為確保最gao轉化效率，整個操作過程應盡量輕柔，并保持低溫。

5） 轉化高濃度的質粒可相應減少最終涂板用量。

6） 平板上克隆密度過大時，由于營養不足，克隆生長變慢，菌落變小。為獲得大菌落，應減少質粒用量。

7） 利fu平濃度應≤25μg/ml，過高濃度不利于農桿菌生長，會降低其生長速度和轉化效率。

8） 培養基中加入利fu平的目的是防止雜菌生長、篩選農桿菌；根據所用菌株抗性加入鏈mei素或慶大mei素可防止Ti質粒丟失，但鏈mei素不利于農桿菌的轉基因操作，一般培養農桿菌時不考慮鏈mei素或慶大mei素，因Ti質粒丟失的概率極低（基本可以忽略）。

9） GV3101(pSoup-p19)感受態細胞雖具有四環素抗性，但在轉入目標質粒涂板篩選陽性克隆時，只需加入目標質粒抗性的抗生素，不用加四環素。

10） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

1) 取-80℃保存的感受態細胞于室溫或手心片刻待其部分融化，達到冰水混合狀態時插入冰浴中使其完quan融化。

2) 往100μl感受態細胞懸液中加入0.01~1μg（體積不大于10μl）質粒DNA（注意：轉化效率較高，第一次使用前建議做預實驗確定適宜的質粒量），用手撥da管底使其混勻，依次于冰上靜置5min，液氮5min，37℃水浴5min，冰浴5min。

3) 加入700μl無抗生素的LB或YEB液體培養基，于28℃振蕩培養2~3h。

4) 6,000rpm離心1min，留取100μl左右上清，之后用槍輕輕吹打重懸菌體。之后加到含相應抗生素的LB或YEB平板上，用無菌玻棒輕輕的將細胞均勻涂開。室溫正置10 min，待液體被吸收后，倒置平板，28℃培養2-3天。

【注意】：當平板只含50μg/ml卡那mei素時，28℃培養48h即可；當平板中同時加入50μg/ml卡那mei素和20μg/ml利fu平時，需28℃培養60h；若使用的平板含50μg/ml利fu平，需在28℃培養72-90h。

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附表1固體和液體LB培養基配方

附表2固體和液體YEB培養基配方

附表3常見農桿菌對抗生素敏感性總表

— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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