AH109 Chemically Competent Cell

酵母菌化學感受態細胞

溫馨提示

見我司整理的酵母雙雜交（Yeast two-hybrid assay）產品專題。

產品標簽

Matchmarker GAL4雙雜交系統；Y2HGold；pGBKT7；Y187；pGADT7；AUR1-C；Aureobasidin A （AbA）；金擔子素；

產品信息

產品包裝

產品描述

AH109是GAL4系統酵母雙雜交用實驗菌株，來源于PJ69-2A酵母菌株，引入lacZ報告基因從而產生AH109。

AH109是MATa型，能直接轉化質?；蚺cMATα型酵母菌株Y187通過接合（mating）操作進行蛋白相互作用驗證或雙雜交文庫篩選和構建。AH109-GAL4酵母雙雜交系統需要兩種質粒配套使用，分別為pGBKT7和pGADT7。前者篩選標志為Trp，用于表達DNA-BD與誘餌蛋白（bait）的融合蛋白；后者篩選標志為Leu，用于表達AD與誘捕蛋白（prey）的融合蛋白。AH109有四個報告基因：lacZ，HIS3, ADE2, MEL1，分別由三個*異源的Gal4反應啟動元件-G1，G2，M1調控，這三種啟動子只有GAL4識別的17bp核心區相同，其余部分都不同。這一特征有效縮減假陽性發生的概率。因為，任何誘捕蛋白單獨結合引起假陽性都需要識別3個不同序列，激活4個報告基因表達。

本品為經特殊工藝制備的AH109酵母菌化學感受態細胞，用pGADT7質粒檢測轉化效率＞10⁴cfu/μg DNA。且在-80℃能穩定保存三個月。

基因型

MATa, trp1-901, leu2-3, 112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ, LYS2::GAL1_UAS^-Gal1_TATA^-His3, MEL1GAL2_UAS^- Gal2_TATA^-Ade2, URA3::MEL1_UAS^-MEL1_TATA- lacZ

注意事項

1/在冰上融化感受態細胞。

2/轉化高濃度質?？上鄳獪p少用于涂板的菌量。同時轉化2-3種質粒可適當增加質粒的用量。

3/AH109對高溫敏感，zui適生長溫度為27-30℃，一旦高于31℃，生長速度和轉化率都呈指數下降。

4/菌落變粉紅色并不是污染，而是酵母細胞生長中的一種常見現象。當酵母細胞在平板上培養幾天，將平板內的腺嘌呤消耗殆盡，那時酵母試圖通過自身代謝途徑合成腺嘌呤以供利用。然而，某些菌株ADE2基因被破壞，腺嘌呤合成受阻。且ADE4，5，6，7，8基因均正常。由此，造成中間產物P-ribosylamino imidazole（AIR）在細胞的積累使得菌落變為粉紅色。

5/酵母菌在缺陷培養基上生長速度比YPDA培養基慢，營養缺陷成分越多，生長越慢，以轉化涂板為例：涂YPDA平板于29℃，48h培養可見直徑1mm克??；涂SD單缺平板于29℃，48-60h培養可見直徑1mm克??；涂SD雙缺平板于29℃，60-80h培養可見直徑1mm克??；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培養可見直徑1mm克??；

6/為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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AH109 Chemically Competent Cell 酵母感受態細胞 克隆與表達分析

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