Fluo-8 AM 鈣離子熒光探針系列應(yīng)用
1、過(guò)程概述
Fluo-8 AM 鈣離子熒光探針系列用于細(xì)胞內(nèi)鈣離子檢測(cè)時(shí)，F(xiàn)luo-3 AM的常用濃度為5μM。通常用含有5μM的Fluo-3 AM的適當(dāng)溶液和細(xì)胞一起在37℃孵育30-60分鐘進(jìn)行熒光探針裝載，隨后適當(dāng)洗滌，洗滌后可以考慮適當(dāng)再孵育20-30分鐘以確保Fluo-3 AM在細(xì)胞內(nèi)*轉(zhuǎn)變成Fluo-3。然后在流式細(xì)胞儀上進(jìn)行檢測(cè)。
2、Fluo-8 AM 鈣離子熒光探針系列使用液的配置
100ug的Fluo-3AM，分子量是1219.9。按實(shí)際需要的摩爾濃度折算，無(wú)水DMSO溶解。一般配置成1~5mM的DMSO儲(chǔ)存液。如出現(xiàn)難溶現(xiàn)象，可以用20%的F127的DMSO溶液助溶。
Fluo-8 AM 鈣離子熒光探針系列使用注意事項(xiàng):
1、熒光染料有淬滅問(wèn)題，應(yīng)盡量避光保存;
2、實(shí)驗(yàn)時(shí)注意個(gè)人防護(hù)，戴手套、口罩;
Fluo-8 AM 鈣離子熒光探針系列應(yīng)用舉例
2、貯存液的配制(5000μM/L)
按照說(shuō)明書(shū)，計(jì)算0.1mg 的摩爾數(shù)為0.089μM ，則需加DMSO18uL，微量加樣器反復(fù)吹打混勻后分裝，按說(shuō)明書(shū)要求避光-20度冰凍保存。